CAPITULO IV

 

DIAGNOSTICO MICOLOGICO BÁSICO EN DERMATOLOGÍA

 

Dra. Yadira Freire Osorio

 

DEFINICION

La micología es una  rama de la microbiología que se dedica al estudio de los hongos; tiene relación con todas las especialidades médicas. En el área de dermatología revisaremos el diagnóstico micológico  de los hongos que invaden los estratos superiores de la epidermis, mucosa y anexos como pelos  y uñas.

 

CARACTERISICAS GENERALES DE LOS HONGOS

Son vegetales que carecen de clorofila, no poseen la propiedad de fotosíntesis y por lo tanto son heterotropos.

 

Son eucariotes, presentan un núcleo bien diferenciado, con membrana doble, bien organizada y nucleolo.

 

Su organelos citoplasmáticos  incluyen mitocondrias, retículo endoplásmico, vacuolas, ribosomas 80S,  aparato de Golgi, hileras  de  microtúbulos,   glucógeno y corpúsculo de woronin  que tiene la función  de obturar los poros de los tabiques en cada micelio.

 

Tienen  una pared celular formada por polipéptidos, polisacáridos, proteínas, lípidos y quitina.

 

Su alimentación la hacen absorbiendo nutrientes simples  y solubles que obtienen al desintegrar polímeros mediante enzimas extracelulares llamadas despolimerasas.

 

Para su crecimiento y desarrollo necesitan: sustancias nitrogenadas como peptona; azucares como glucosa y maltosa; gelosa como soporte sólido que permite a los hongos  filamentosos  desarrollar micelio aéreo con órganos de fructificación; ph 5-6; siendo  el medio glucosado o maltosado de Sabouraud el que reúne estas características. 

 

TALO O MICELIO

Es el cuerpo o estructura básica de los hongos, el cual a su vez puede estar formado por múltiples filamentos o hifas o por estructuras unicelulares o levaduras. Puede ser de 2 tipos:

 

1.      TALO VEGETATIVO

Que cumple con las funciones de nutrición, fijación y crecimiento. Estaformado por el talo unicelular y el talo filamentoso.El talo unicelular esta representado por las levaduras o por los esporos los cuales tienen un diámetro medio de 6-8 micras y se multiplican por brotación o por escisión.

 

El talo filamentoso o hifa esta constituido por  un tubo cilíndrico, de pared celular  rígida, de  1 a 30 micras de diámetro  que crece por el vértice de cada una  de sus ramas. Presenta tabiques transversales dando lugar a la formación del    MICELIO TABICADO

 

2.      TALO REPRODUCTOR 

Que se encarga de la conservación  y diseminación de la especie mediante la formación de células llamada esporos. La reproducción puede ser asexuada (teleomorfa) o sexuada (anamorfa);   los hongos que presentan ambas formas  se llaman holomorfos.Entre el talo unicelular y el filamentoso  hay una formación intermedia llamada SEUDOMICELIO el cual en determinadas condiciones de cultivo o en las lesiones se ha formado por BLASTOSPOROS que no se separan.

 

 

PROCEDIMIENTOS DIAGNOSTICOS DEL LABORATORIO

 

PREPARACION  DEL PACIENTE

Es una etapa importante para reducir al máximo la presencia de microorganismos contaminantes y evitar la presencia de sustancias extrañas que interfieran en la observación microscópica.

 

El paciente debe suspender cualquier tratamiento antimicótico 10 días antes de la toma de la muestra; igualmente debe abstenerse de aplicar cremas, pomadas, polvos sobre la piel, así como esmaltes en las uñas, lacas en el  cabello por lo menos 5 días antes de la toma de la muestra

 

Se recomienda  previamente limpiar el área afectada con alcohol o agua destilada estéril

 

MATERIALES

Se utiliza hojas de bisturí  con punta roma esterilizadas, cajas de petri, pinzas, láminas portaobjetos, tijeras pequeñas, cortauñas,  cepillos, laminillas cubreobjetos, cinta adhesiva

 

OBTENCION DE LA MUESTRA

El  material que se obtiene en la toma de la muestra  depende de la zona afectada, así podremos obtener:

 

ESCAMAS: Los hongos que ocasionan las micosis superficiales se encuentran en el estrato corneo de la epidermis por lo tanto hay  que tomar y tratar las escamas para eliminar la queratina y liberar así las estructuras micóticas lo que permite una  optima visualización.

 

Son recolectadas con una hoja de bisturí punta roma primeramente introducido en alcohol y luego esterilizado  en la llama, se realiza un raspado de varias lesiones para obtener así la mayor cantidad posible de material,  el cual puede recogerse en una caja de petri o directamente sobre la lámina portaobjetos. Un excelente material es el que se obtiene del borde activo de las lesiones, sobre todo en el caso de lesiones circinadas.

 

Cuando las lesiones son  eritematosas, húmedas o con exudados, la muestra deberá también tomarse con hoja de bisturí y si hay vesículas, éstas deberán romperse para  recolectar el material.

 

Si estamos frente a máculas hipo o hipercrómicas con sospecha de una pitiriasis versicolor, se debe aplicar la técnica de la cinta adhesiva, la cual consiste en aplicar un  pedazo de cinta adhesiva transparente sobre las lesiones, presionar un poco y después de unos segundos retirarla y colocarla sobre  una lámina portaobjetos

 

UÑAS: Dependiendo del  sitio de afección de la uña se tomará la muestra. Si está localizada en el lecho ungueal (onicomicosis subungueal distal o proximal) o en la uña misma (onicomicosis superficial blanca), se realiza un raspado profundo del lecho ungueal o de la lamina afectada, partiendo del extremo distal  al proximal y recolectando el detrito subungueal de la parte incolora, pigmentada, distrófica y más débil de la uña. Es necesario obtener la muestra  en el límite entre la región sana y la enferma.

 

PELOS: En el caso de una tiña capitis  o barbae, se toman los pelos cortos, gruesos y que se extraigan fácilmente con una pinza de depilación; muchas veces las estructuras fúngicas están en los folículos pilosos. Las escamas del cuero cabelludo se toman con bisturí.

 

Es conveniente  obtener de 10 a 20 pelos y examinar la zona afectada con luz de Wood en  busca de zonas fluorescentes que indican la presencia de dermatofitos.

 

Cuando se sospecha la presencia  de piedra negra o piedra blanca se emplea una lupa  para escoger aquellos pelos que presenten nódulos.

 

EXAMEN MICROSCOPICO

Para aclarar la capa  córnea de la piel y sus anexos es necesario usar soluciones que disuelven la queratina (sustancias queratolìticas) sin afectar la morfología de los elementos fúngicos.

 

Los mas comunes son el KOH (hidróxido de potasio)  en concentración del 10-40%, al que se le puede adicionar tinta parker negra, dimetilsulfóxido o blanco calcoflúor (su uso requiere de microscopía de fluorescencia).

 

La revisión microscópica se lleva a cabo con lentes de x10  y  x 40.

 

Los dermatofitos en las muestras de uñas y escamas aparecen como hifas o micelios tabicados, largos, rectos,  de aspecto hialino, con tabiques  dispuestos a intervalos regulares de distancia, ramificados (foto 1). En ocasiones estas hifas se presentan de color  café o verde oscuro, ramificadas, septadas y con extremos  delgados, nos encontramos así ante la presencia de una tiña negra

 

 

1. Hifas o micelios hialinos, tabicados

 

En la Candidiasis  los elementos se presentan en forma de levaduras; levaduras con gemación o brotantes que constituyen los blastosporos (fotos 2 y 3) y por ser la cándida albicans un hongo dimórfico se encuentra además la presencia de seudomicelio o seudohifa, la cual a veces es indiferenciable de la hifa verdadera.

 

 

2.  Blastosporos x 10

 

3. Blastosporos  x 40

 

En la pitiriasis versicolor (producido por  M.furfur) se observa acúmulos o racimos de levaduras ovaladas o redondeadas de 4-8 micras de diámetro,de pared gruesa,  acompañadas de micelios cortos, sinuosos, en forma de s, en ocasiones largos y delgados (foto 4); ambos elementos  pueden presentarse independientemente, pero si lo hacen juntos dan la imagen típica de “albóndigas y espagueti”.

 

4.  M.furfur, levaduras y micelios cortos

 

El examen de los pelos en la tiña capitis endotrix (su agente es el T.tonsurans) nos muestra  la presencia de hifas con esporos parasitando  el interior del pelo (foto 5), cuyo límite se mantiene intacto. En la tiña capitis ectotrix (agente M.canis)  los esporos  o artroconidias se encuentran  formando una vaina en la parte externa del pelo (foto 6). En la forma ectoendotrix se encuentran hifas y pocos esporos en el interior y abundantes esporos hacia el exterior del pelo.

 

 

5. Pelo con esporos endotrix

 

6. Pelo  con esporos ectotrix

 

Los nódulos de Piedra blanca son de color crema o gris y al microscopio se observan  formando una vaina alrededor del pelo, la cual esta formada por hifas que al fragmentarse dan origen a artroconidias  ovaladas o rectangulares de 2-4 um  de diámetro.

 

Los nódulos de Piedra negra son estructuras de tipo ascostroma de color café oscuro, de paredes gruesas que contiene hifas septadas, entrelazadas y que al romperse liberan ascas de 25-55 um, las cuales contienen de 2 a 8 ascosporas en su interior

 

CULTIVOS

 

Una fracción de la muestra obtenida se utiliza para cultivarla.   Los medios de cultivo más utilizados son el agar sabouraud base, agar sabouraud glucosado, al cual se le puede agregar antibioticos como  ciloheximida o cloranfenicol,  el DTM que contiene además un indicador de rojo fenol  y el  medio mycosel

La temperatura óptima de crecimiento es de 28 a 30 grados. El tiempo de crecimiento de las colonias esta entre  4 y 15 días

 

Se debe  estudiar las características macroscópicas, microscópica y fisiológicas

 

CARACTERÍSTICAS  MACROSCOPICAS

·    Forma y tamaño

·    Color en anverso y reverso,por ej.t. rubrum (foto 7) tiene anverso blanco y reverso rojo

·    Difusión del color

·    Coloración: blanca, rosada, gris, anaranjada, etc

·    Textura:  Yesosa, terrosa,  vellosa, cremosa.granulosa

·    Superficie:  Elevada o plana

·    Aspecto: Radiado (ej. M. canis), cerebriforme, plegado

 

·Consistencia: Dura, suave, firme

 

 

7. Características macroscópicas T. rubrum

 

CARACTERISTICAS MICROSCOPICAS

·    Examen a través del tubo

·    Examen de un fragmento de cultivo

·    Método de la cinta adhesiva transparente

·    Cultivo en lámina o microcultivo

 

CARACTERISITICAS FISIOLOGICAS

·    Estudio del talo:  Presencia de filamentos o levaduras

·    Presencia de esporas sexuadas

·    Presencia de esporas asexuadas

·    Estudio del pleomorfismo

·    Prueba de la ureasa

·    Requerimiento o no de tiamina

          

BIBLIOGRAFÍA

 

1. Arenas R, Micología Médica Ilustrada. 2ª Ed Mexico: Interamericana,Mc Graw Hill,2003 ; 19-33, 41-57, 61-99

 

2. Arango M, Castañeda E, 2ª edición Colombia.  Micosis humanas. Procedimientos diagnósticos. Exámenes directos, 2003,        21-45

 

3. Negroni R,: Lecciones de Clínica Micológica. Bs As Argentina 1997

 

4. Lacaz C, Porto E, Costa Matins JEC. Tratado de Micología Médica. Lacaz 9ª Edición. Sao Paulo, Brasol: Sarvier, 2002

 

5. Weitzman I, Summerbell R:C.  The Dermatophytes.Clinica Microbiol  Rev 1995; 8 (2): 240-59

 

6. Negroni R, Guelfand L, y Col. Acta bioquímica clinica  latinoamericana.  Manual de procedimientos para laboratorio de Micología Médica.Bs.As. Argentina, 1999;  17-36

 

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