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Artículos para médicos y pacientes

Detección y Genotipicación del Papiloma Virus Humano

 

Dr. Juan Carlos Ruiz Cabezas
Blgo. Ramiro Burgos G.
Blga. Lindsay García R.
Blga. María Sinche S.
Tlgo. Franklin Almeida
SOLCA - GUAYAQUIL

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Resumen
Según estadísticas de SOLCA-Guayaquil, el 51% de los cánceres detectados en mujeres son de cuello uterino, y el papiloma virus humano (VPH) está íntimamente implicado en el desarrollo del 95% de este tipo de neoplasia. El factor de alto riesgo para el desarrollo del Cáncer Cervico Uterino se encuentra codificado en el ADN viral de los tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 y 73 del VPH.
 
La detección temprana del VPH juega un papel importante en la prevención del cáncer cervical, técnicas moleculares como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) poseen una sensibilidad y especificidad cercanas al 98% para su detección, reduciendo de esta manera los falsos negativos obtenidos con las técnicas convencionales.
 
En este estudio se encontraron que todas las pacientes fueron positivas para VPH. Los genotipos encontrados fueron: 6, 11, 16, 18, 31, 33, 45, 52, 53, 56, 66 y 68. Existió una elevada incidencia de genotipos de alto riesgo en la población estudiada.
 
Objetivos
 • Determinar los genotipos del VPH en los pacientes estudiados.
 • Establecer la frecuencia de los genotipos en la población estudiada.

                                                                                                                                     

 

Materiales y Métodos
Desde febrero del 2006 hasta octubre del 2007 se analizaron 80 pacientes con diagnóstico de cervicitis crónica, debida a una infección con PVH. Los pacientes presentaban edades que iban desde los 20 hasta los 88 años con una media poblacional de 39 años. Las muestras fueron cepillados cervicales enviados por diferentes Servicios de Ginecología de Guayaquil. A partir de la muestra recibida se procedió a concentrar las células y extraer ADN con fenol-cloroformo.

 

La detección del genotipo viral fue realizada por PCR – dot blot reverso (kit Innolipa-VPH), siguiendo las indicaciones del fabricante (Tabla 1). El resultado fue interpretado luego de verificar los números de bandas reactivas resultantes del proceso de hibridación (figura 1).

 

Tabla 1. Condiciones de amplificación y detección de genotipo por PCR-dot blot reverso.

 
Figura 1. Interpretación de las bandas reactivas
¹ Baño maría con agitación (Stuart Scientific)
a 80 r.p.m.
² Equipo Perkin-Elmer 2400

 

Resultados

Se estabilizaron los métodos referidos anteriormente, y con ello se constató que el 100% de nuestras muestras (80 pacientes) fue positiva para VPH.

Los genotipos encontrados fueron: 6, 11, 16, 18, 31, 33, 45, 53, 56, 66 y 68. De estos genotipos, están asociados con un alto riesgo de desarrollo de cáncer cervical las variantes 18, 31, 51, 52, 68 y 59 (gráfico 1).

 

Gráfico 1. Prevalencia de los genotipos de VPH encontrados en el estudio.

 

El 71% de nuestra muestra presentó infecciones múltiples de VPH y, el 93,3% al menos un genotipo viral de alto riesgo para desarrollo de cáncer cervical (Gráfico 2).

 

Los genotipos más frecuentes fueron las variantes 6, 11 de bajo riesgo y 52 de alto riesgo (gráfico 2).

 

Gráfico 2: Tipos de infecciones de VPH en pacientes estudiados.

 

Discusión y Conclusiones

Considerando la frecuencia del cáncer cervical (51% de todos los cánceres en ION-SOLCA, Guayaquil) y su relación con el VPH resultó imprescindible implementar el análisis y tipificación molecular de los genotipos del virus como método para aumentar la eficacia del control clínica en pacientes con infecciones de VPH de alto riesgo.

 

La PCR es una de las técnicas moleculares mas utilizadas debido a que copia millones de veces, in Vitro, un segmento de ADN, esta copia exponencial le da, a esta prueba, un alto nivel de sensibilidad.

 

El conocer el genotipo del virus es un arma fundamental del médico para tomar las decisiones clínicas correctas en los pacientes que poseen infección con virus de alto riesgo. La detección con PCR dot blot reverso de los genotipos se torna entonces en una de las piezas claves de la edificación de los protocolos de control que se tomen con los pacientes.

 

Es una técnica que no requiere de mayor tiempo, abarata costos en relación a la secuenciación y determina los genotipos de alto riesgo y de mayor frecuencia en comparación a la captura híbrida que tan solo determina la presencia o ausencia de genotipos virales de alto riesgo.

 

En la población estudiada el 93,3% de los casos presentaron por lo menos un genotipo de VPH de alto riesgo. La determinación de genotipo no sólo permite evaluar el riesgo para la paciencia, sino que ayuda a focalizar los programas de prevención del cáncer de cérvix y, el médico adquiere valiosa información para un adecuado manejo clínico de la paciente.

 

Las infecciones múltiples con diferentes genotipos de VPH en un mismo paciente representan un mayor riesgo en el desarrollo de cáncer cervical, resistencia al tratamiento y la posibilidad de reinfecciones subsecuentes4. En nuestra población, el 80% de casos presentó infección con múltiples genotipos.

 

En cuanto a la prevalencia de los diferentes tipos de virus, se conoce que el más frecuente es la variante 16 de alto grado de malignidad, aunque para nuestra población las variantes 6, 11 y 52 presentaron un predomino con un 23%, 21% y 19% respectivamente.

 

Los tres grupos predominantes (6, 11 y 52) que son de bajo y alto riesgo respectivamente, implica que dentro del estudio se pueden constatar las diversas combinaciones de genotipos que puede presentar un paciente.

 

Los datos obtenidos en nuestro estudio, muestran una tendencia claramente diferente a lo reportado para otras poblaciones. La gran cantidad de casos con infecciones múltiples sería una de las posibles explicaciones de la alta incidencia del cáncer de cuello uterino para nuestra población.

 

La importancia de estos resultados radica en el hecho de haber determinado la presencia de infecciones múltiples que es un factor de riesgo mayor al simple genotipo viral, este hecho hace pensar que es necesario un cambio en las políticas de control epidemiológico como la vacuna para VPH, con el fin de disminuir su incidencia.

 

Bibliografía

1. A.A.T.P. Brink, G.D. Zielinski, R.D.M. Steenbergen, Clinical relevance of human papillomavitus testing in cytopathology Daparment of Pathology, Vrij Universiteit Medical Center, Amsterdam, The Netherlands 2004.

2. Anco Molijn, Berhard Kleter, Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections Journal of Clinical Virology 32S (2005) S43-S51

3. C.S. Herrington, What we could do now: Molecular Pathology of Gynaecological Cancer. J Clin Pathol 2001; 54:222-224

4. Janet G. Baseman, Laura A. Koutsky The epidemiology of human papillomavirus infections Journal of Clinical Virology 32S (2005) S16-S24

5. Mark J. Espy, Paul N.Rys, Detection of Herpes simplex virus DNA in Genital and Dermal Specimens by Light  Cycler  PCR after extraction using the Iso Quick, MagNA Pure, and Robot 9604 Methods, Journal of Clinical Microbiology, 2001: 2233-2236

6. Nubia Muñoz M.D., F: Xavier Bosch M.D., Epidermiological Classification of Human Papillomavirus Types associated with cervical cancer. The New England journal of Medicine 2005.

7. Registro Nacional de Tumores Cáncer en Guayaquil 1997-2000, Sociedad de Lucha contra el Cáncer Sede Nacional Instituto Oncológico Nacional Dr. Juan Tanca Marengo. Guayaquil – Ecuador.

8. Thomas C. Wright, Jr., M.D., and Mark Schiffman, M.D. Adding a test for human Papillomavirus DNA to Cervical-Cancer Screening. The New England Journal of Medicine 2005.

Autor:

REVISTA CIENTIFICA COLPOSCOPIA

Sociedad de Patología del Tracto Genital Inferior y Colposcopía del Guayas
dr_jleon@hotmail.com
www.colposcopiaguayas.com

 

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