El diagnóstico de influenza se fundamenta en el
diagnóstico clínico (historia clínica y exámen físico). Las
pruebas de laboratorio juegan también un papel importante en el
diagnóstico y tratamiento. El aislamiento viral o la detección
del antígeno viral en las secreciones respiratorias son las
técnicas de mayor utilidad en la etapa aguda de la enfermedad.
El virus puede ser detectado a través de muestras
tomadas en mucosas de nariz o garganta (hisopado
nasofaríngeo), esputo, por diferentes técnicas. El
diagnóstico rápido de la infección mediante estudio de
inmunofluorescencia o identificación inmunoenzimático (ELISA)del
antígeno viral en células epiteliales de las secreciones del
tracto respiratorio, no arrojan ninguna información acerca de
los subtipos virales. Estos test rápidos tienen una gran
utilidad en la atención primaria del paciente, dada por el
médico general o por centros que tienen que descartar la
enfermedad viral en grandes grupos poblacionales, como está
sucediendo en estos momentos.
El uso racional de los test rápidos es de
utilidad para iniciar el tratamiento antiviral con inhibidores
neuraminidasa, el cual debería ser instaurado dentro de las
primeras 48 horas de iniciado la enfermedad, para que no pierda
su eficacia, la cual es disminuir el tiempo de la enfermedad.
Ejemplos de estas pruebas son: FLU OIA y QUICKVUE Influenza
test son basados en la detección del antígeno viral usando
anticuerpos monoclonal. Ahora hay pruebas más modernas de
tercera generación ( ZSTATFLU) basado en la detección de
la neuraminidasa viral. Otros métodos rápidos (< 30 minutos )
DIRECTIGEN A, de hisopado de nasofaríngeo, faríngeo,
nasal. Las pruebas por Inmunofluorescencia demoran entre 2 y 4
horas y las pruebas por ELISA identificación inmunoenzimática
de la enfermedad, mediante la toma de muestras de hisopado
nasofaríngeo, nasal y lavado bronquial, demoran 2 horas.
Los diagnósticos serológico (en sangre), son de
enorme utilidad desde el punto de vista epidemiológico y mide
los títulos de anticuerpo inhibidores de la hemaglutininación
en sangre(IHA), inmunoanálisis enzimático (ELISA), estos
títulos tienen que estar aumentados 4 veces su valor
referencial, no son pruebas rápidas, se positivizan a los 10-
14 días (2 semanas).
El cultivo viral de muestras de hisopado
nasofaríngeo, esputo y lavado bronquial, requiere de un
laboratorio especializado y demora una semana (5-10días). La
línea celular preferida para el cultivo celular de influenza es
la MDCK (Madin Darby Canine Kidney), este medio nutritivo debe
contener tripsina. Luego se puede realizar la tipificación del
virus (determinación del subtipo) por análisis antigénico de su
Hemaglutinina HA.
Otro método clásico de aislamiento del virus es
en huevos embrionados de gallina de 9-10 días de incubación, los
virus de la influenza se propagan exitosamente bien en huevos
embrionados inoculados en la cavidad amniótica (por trans
iluminación)y/o alantoides incubados a 33° C durante 76 a 96
horas.
PCR y LA PCR-RT l (reacción en cadena polimerasa
–transcriptasa reversa). Consiste en el análisis del ARN viral.
Cada virus tiene una característica genética individual
(parecida a las huellas dactilares de cada individuo). Con esta
técnica de biología molecular se analiza el material genético
(ADN o ARN) mediante la amplificación y comparación con muestras
iniciadoras (cebadores o primer), podemos ejemplificar esto como
los códigos barra de una etiqueta.
Este ARN del virus se analiza de muestras tomadas
de hisopado nasofaríngeo, esputo y lavado bronquial. En el ARN
del virus almacena en forma codificada la información genética
del virus. La PCR es una potente técnica de identificación del
genoma del virus de la gripe.
